Prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa en Diabetes Gestacional
Tema: Prevalencia de los genotipos fimA II Y fimA IV de Porphyromonas gingivalis en un grupo de mujeres mexicanas con diabetes gestacional en la región centro de México.
0bjetivo: Determinar la prevalencia de los genotipos fimA II Y IV de Porphyromonas gingivalis en mujeres que presenten diabetes gestacional para su adecuado seguimiento, tratamiento y prevención.
Muestra: Aislado relativo y se seco con una torunda de algodón la cara palatina del primer molar superior derecho; las muestras se obtuvieron con una tira de papel FTA en 3 puntos.
Tipo: ADN genómico humano
Extracción: A través de fragmentos de papel FTA durante 20 s, y se depositaron en un microtubo donde fueron almacenadas a 4 grados hasta su uso.
Los fragmentos de 1 mm del papel FTA fueron lavados y enjuagados de acuerdo con las especificaciones del proveedor (Whatmann, Alemania, Buckinghamshire, Reino Unido). Un fragmento de papel de 1 mm fue utilizado para cada reacción de PCR.
Gen: Gen de la b-globina = 562 pb
fimA II = 257 pb
fimA IV = 251 pb
PCR: PCR Multiplex
Para cada reacción se uso un ADN molde: fragmento de 1mm de papel FTA.
La amplificación se llevo a cabo por 35 ciclos, de desnaturalización a 94 ºC por 30 s; un alineamiento a 60 ºC por 30 s y la extensión a 72 ºC por 60 s.
Fueron necesarias una pre-desnaturalización a 94 ºC por 10 min y una extensión final a 72 ºC por 7 min.
La determinación de los genotipos se llevo a cabo de forma separada o mediante PCR multiplex para detectar genotipos simultáneos.
Las reacciones se llevaron a cabo en un termociclador a 9700.
Visualización: Electroforesis
Sensibilidad y Especificidad: Se usa para enfermedades infecciosas
Referencias:
1. Garcia, R.; Terrones; M.; Malacara, A.; Zaragoza, N.; Cabral, A.; Gutierrez, R. Prevalencia de los genotipos fimA II Y fimA IV de Porphyromonas gingivalis en un grupo de mujeres mexicanas con diabetes gestacional en la región centro de México. [Internet] 2014. Revista Clinica de Periodoncia Implantología y Rehabilitación Oral. 7(2): 85*92. Disponible en :https:https://scielo.conicyt.cl/pdf/piro/v7n2/art07.pdf o https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0719-01072014000200007&lng=es.%20%20http://dx.doi.org/10.4067/S0719-01072014000200007.
0bjetivo: Determinar la prevalencia de los genotipos fimA II Y IV de Porphyromonas gingivalis en mujeres que presenten diabetes gestacional para su adecuado seguimiento, tratamiento y prevención.
Muestra: Aislado relativo y se seco con una torunda de algodón la cara palatina del primer molar superior derecho; las muestras se obtuvieron con una tira de papel FTA en 3 puntos.
Tipo: ADN genómico humano
Extracción: A través de fragmentos de papel FTA durante 20 s, y se depositaron en un microtubo donde fueron almacenadas a 4 grados hasta su uso.
Los fragmentos de 1 mm del papel FTA fueron lavados y enjuagados de acuerdo con las especificaciones del proveedor (Whatmann, Alemania, Buckinghamshire, Reino Unido). Un fragmento de papel de 1 mm fue utilizado para cada reacción de PCR.
Gen: Gen de la b-globina = 562 pb
fimA II = 257 pb
fimA IV = 251 pb
PCR: PCR Multiplex
Para cada reacción se uso un ADN molde: fragmento de 1mm de papel FTA.
La amplificación se llevo a cabo por 35 ciclos, de desnaturalización a 94 ºC por 30 s; un alineamiento a 60 ºC por 30 s y la extensión a 72 ºC por 60 s.
Fueron necesarias una pre-desnaturalización a 94 ºC por 10 min y una extensión final a 72 ºC por 7 min.
La determinación de los genotipos se llevo a cabo de forma separada o mediante PCR multiplex para detectar genotipos simultáneos.
Las reacciones se llevaron a cabo en un termociclador a 9700.
Visualización: Electroforesis
Sensibilidad y Especificidad: Se usa para enfermedades infecciosas
Referencias:
1. Garcia, R.; Terrones; M.; Malacara, A.; Zaragoza, N.; Cabral, A.; Gutierrez, R. Prevalencia de los genotipos fimA II Y fimA IV de Porphyromonas gingivalis en un grupo de mujeres mexicanas con diabetes gestacional en la región centro de México. [Internet] 2014. Revista Clinica de Periodoncia Implantología y Rehabilitación Oral. 7(2): 85*92. Disponible en :https:https://scielo.conicyt.cl/pdf/piro/v7n2/art07.pdf o https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0719-01072014000200007&lng=es.%20%20http://dx.doi.org/10.4067/S0719-01072014000200007.
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